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微量BCA蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)
MicroBCAProteinAssayKit
微量BCA蛋白定量試劑盒
Cat.No. K2011
保存：BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：2-8℃
其 它 組分：室溫
組分說(shuō)明
Catalogno. K2011
Volume 120ml
MicroBCAReagentA （MA） 120ml
MicroBCAReagentB （MB） 120ml
MicroBCAReagentC （MC） 6ml
BSA （2mg/ml） 2ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于 BCA（BicinchoninicAcid）法研制而成，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與 Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時(shí)將 Cu 2+ 還原成 Cu +BCA 試劑可敏感特異地與Cu+結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物。在562nm 處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可根據(jù)吸收值的大小來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。本試劑盒專(zhuān)為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計(jì)，可精*&確測(cè)定濃度為 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測(cè)量差異極低。本試劑同多種非離子型去污劑有較好的相容性。
注意事項(xiàng)
1. BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)?
2. 操作中請(qǐng)佩戴手套。
3. 本產(chǎn)品僅限科研使用。
操作步驟
1. 稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。
管號(hào) 稀釋液用量（μl） 標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl） 終濃度（μg/ml）
A 360 40 200
B 400 100（從A管中?。? 40
C 250 250（從B管中?。? 20
（從 管中取）
D 250 250 C 10
E 250 250（從D管中?。? 5
F 250 250（從E管中?。? 2.5
G 250 0 0(空白)
2. 配制 MicroBCA 測(cè)試工作液：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的數(shù)量配制測(cè)試液。
試劑 MD 配制：4volumeMC+100volumeMB
測(cè)試工作液 WR 配制： 1volumeMA+1volumeMD
充分混勻后待用
3. 試管及微板檢測(cè)（蛋白濃度檢測(cè)范圍：2.5-200 μg/ml）
1）按上表準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣品。
2）將蛋白樣品和測(cè)試工作液 WR 按照 1:1（體積比）比例加入，充分混勻。在 60 度孵育 60 分鐘。
3）孵育完成后冷卻到室溫，在 562nm 處讀取吸光度值。
4）標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣品的吸光度值要扣除空白對(duì)照的吸光度值，然后進(jìn)行濃度的計(jì)算。
5）如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
附表
附表 1. 干擾物質(zhì)表
化合物 耐受濃度 化合物 耐受濃度
緩沖液 去垢劑和變性劑
乙酸鹽 0.2M Brij35 1%
甘氨酸 1M CHAPS 1%
HEPES 0.1M 鹽酸胍 4M
MES 50mM NP-40 1%
MOPS 50mM 辛葡糖 1%
Na+-檸檬酸 ＜1mM SDS 1%
PIPES 50mM Triton X-100 1%
磷酸鈉 0.1M 糖類(lèi)
乙酸鈉 0.2M pH 5.5 葡萄糖 10mM
TES 50mM 蔗糖 1M
Tris 0.1M 螯合劑
鹽類(lèi) EDTA 10mM 還原劑
硫酸銨 干擾
NaCl 1M β-巰基乙醇 50μM
尿素 3M DTT 1mM
極性化合物 其他
DMSO 5% 脂類(lèi) 干擾
甘油 10% HCl/NaOH 0.1M
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
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